服务内容

miRNA相对定量检测
miRNA绝对定量检测

（也提供对mRNA的检测服务）

miRNA检测方法
目前市场占主导地位的商品是Invitrogen公司(原ABI公司)开发的实时荧光定量PCR方法(TaqMan miRNA检测方法)该方法在一定程度上克服了上述缺陷，但是仍具有高成本的缺点。同时，我们通过自主创新，成功研发出一种具有自主知识产权且方便实用的miRNA定量检测技术(RAM),这种方法具有高灵敏度、高特异性、低成本等特点，目前已得到一定程度的应用。

RAM技术特点
1、灵敏度高：该方法的检测灵敏度高达1000个拷贝数，检测范围为103到1010拷贝数，该方法足以检测单个细胞中miRNA状况的变化
2、特异性好：能对miRNA中只有一个碱基差别的同族序列进行特异性检测。独特的RT-primer、bridge probes以及amplification primers(mainly P1)设计能够区分3′、5′及中间区域的碱基差异(Figure3)。更为独特的是,当实验设计目的为检测成熟miRNA时，即使pre-miRNA的含量高达100倍，对检测目标的干扰并不会比背景干扰高
3、样品处理简单：只需从样品中提取总RNA，无需特殊处理，可对其中的miRNA进行直接检测。可以检测约单个细胞的miRNA(每个细胞的总RNA量约为0.02ng)，以及不同组织的miRNA。
4、成本较低，无须TaqMan探针等昂贵试剂
5、多种内参检测：我们方法可以对目前通用的内参U6 snoRNA检测，也可检测在组织中普遍稳定表达的mir-191等miRNA内参，可以方便的根据客户的需求设计不同的内参检测

相关知识

成熟的miRNA由于自身碱基数过少，同族miRNA之间通常只有一到两个碱基的差别，而且绝大部分miRNA在细胞中的表达水平都比较低，这些特性使传统检测方法受到很大限制。目前常用的检测miRNA方法有：
1、Northern Blot标准检测方法，缺点是灵敏度低，需要几十微克总RNA，费时费力
2、实时定量PCR检测基于实时荧光定量PCR和等温放大的方法，优点是灵敏度高
3、微阵列芯片检测方法基于基因芯片的方法，优点是通量高；缺点是有背景和杂信号干扰，特异性和准确度较差
4、大规模测序方法利用Solexa等大规模测序技术，进行高通量多样本的miRNA表达图谱的分析，但是成本较高。