内容编辑植物基因编缉服务
分类: 植物
发布时间: 2015-04-26 16:48
水稻、小麦、烟草、拟南芥、玉米、大豆、棉花、番茄等基因敲除或敲入。TALEN和CRISPR/Cas9的相继问世，将靶向基因操纵推向一个又一个高潮，尽管最早用于动物，但是经过改造也成功应用于植物，先后在水稻、小麦、玉米、大豆、土豆、烟草、棉花等作物中拿到突变体。这两项靶向基因编缉技术可广泛用于基因功能验证，品质改良，提高抗性等方面。公司持续优化用于植物的载体密码子偏好和启动子，现已有多种针对不同物种的配套产品可供科研人员个性化选用，亦可针对水稻、小麦、烟草、拟南芥等植物提供得到突变体的全套服务。
服务内容
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步骤 |
服务内容 |
配套产品 |
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选择技术 |
TALEN |
CRISPR/Cas9 |
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明确物种 |
水稻、小麦、烟草、拟南芥、玉米、大豆、棉花、番茄等 |
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设计靶点 |
一般设计3-5个，从中选2-3个有切割活性且活性高的靶点 |
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体外验证靶点活性 |
—— |
gRNA/Cas9体外酶切筛选有切割活性的靶点（可选） |
Cas9/gRNA靶点效率检测试剂盒；CAS9酶 |
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载体构建 |
选择适合物种的载体（附后），使用纳米自组装技术（PCT专利）组装增强型E-TALEN左臂和右臂 |
选择适合物种的载体（附后），将gRNA靶点信息连接到载体上 |
E-TALEN载体构建试剂盒 CRISPR/Cas9载体构建试剂盒 |
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SSA活性检测 |
E-TALEN质粒和靶点共转293T细胞，检测luciferase活性 |
—— |
SSA报道质粒构建试剂盒 |
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细胞内源活性验证 |
将打靶载体转入原生质体检测切割活性 |
核酸免提试剂盒 T7E1酶 |
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农杆菌转化愈伤组织 |
□35s-talen，Nos- Hyg □35s-talen，35s- Hyg □super-talen，35s-tfdA (棉花用双元载体) □35s-talen，35s- bar □Ubi-talen，35s- bar |
单子叶植物 □LB-Ubi-mpCas9-wU6-gRNA-35S-Hyg-RB □LB-Ubi-mpCas9-wU6-gRNA-35S-bar-RB □LB-Ubi-mpCas9-rU6-gRNA-35S-Hyg-RB □LB-Ubi-mpCas9-rU6-gRNA-35S-bar-RB 双子叶植物 □LB-Ubi-dpCas9-atU6-gRNA-35S-Hyg-RB □LB-Ubi-dpCas9-atU6-gRNA-35S-bar-RB |
E-TALEN载体构建试剂盒； CRISPR/Cas9载体构建试剂盒
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筛选突变体 |
剪叶片提基因组，扩增靶序列，T7E1酶切初步验证。 进一步测序验证 |
核酸免提试剂盒 T7E1酶 |
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自交 |
去除打靶质粒 |
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我们的优势：
1. 多种植物密码子偏好和启动子优化载体，其有效性已经过实践验证。
TALEN：针对植物优化了密码子，TALEN双元载体以pCAMBIA-1301为骨架改造而成；
CRISPR/Cas9：1）玉米Ubi启动子表达植物密码子优化的Cas9蛋白；2）3’UTR提高Cas9表达水平。
2. 使用E-TALEN（增强型TALEN）显著提高基因组DNA剪切效率(点击查看实验数据)，特有纳米自组装专利技术使TALEN质粒组装时间比市场现有方法缩短一半,成本降低一倍。3. 已在水稻、小麦、烟草、棉花、土豆等植物拿到突变体，多种植物整体解决方案和实战经验,。
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