注：对于难转染的细胞可考虑使用CRISPR-Cas9慢病毒载体系统

预试验内容
  1、细胞的转染效率：尝试各种转染方法，如Lipo2000、LTX、电转等，以期找到转染效率相对高的方式。
  2、药筛浓度检测：如果转染效率不高，而过流式对细胞损伤很大，需要做抗性筛选，检测出杀死细胞的筛选药物的最小浓度。
  3、单克隆培养情况：观察细胞是否可以单克隆培养，起码需要两周时间培养才能检测单克隆培养周期。这个周期很大程度影响了细胞的检测周期。
  4、细胞中目标基因存在多个拷贝，这样的敲除将大大增加了工作的难度。

风险提示
一、敲除的不确定性
  1、设计多个靶点都没有内源活性，可能是切割区域内存在染色质复杂结构，建议换一个新的区域。（参考文献NAR，2014年）。
  2、筛选一轮需要检测100-200个单克隆细胞，约一个月时间。要拿到纯合子一般需要多轮筛选

二、致死基因的敲除风险
  1、致死：如细胞周期调控基因、House keeping基因等，敲除后有可能导致细胞死亡或者状态不佳。因此无法获得纯合子的细胞株。
  2、关键基因：这些基因的敲除有可能导致细胞的生长状态不佳。
  3、其他：少数基因获得纯合子后，在增殖过程中，生长状态会变的越来越差，最终导致无法运输。