服务内容
项目名称
物种
备注
全身敲除[移码突变]
小鼠/大鼠/猴子
全身敲除[片段删除]
小鼠/大鼠/猴子
条件性敲除
小鼠/大鼠
条件性过表达
小鼠/大鼠
点突变
小鼠/大鼠
定点敲入
小鼠/大鼠
基因替换(人源化)
小鼠/大鼠
转基因
小鼠/大鼠
注:对于未提及的物种,我们可以提供上游配套产品和技术支持,详询。
1. 条件性敲除方面,我们拥有领先的CAS9-nickase技术,直接显微注射受精卵,使得两个loxp的同源敲入在无抗性筛选的情况下效率达到了30%,由于基本在单细胞期实现敲入,同时避免了脱靶风险,获得的F0代稳定遗传率很高,非常适合与CRE鼠提前交配而有机会缩短三个月的周期。
2. 敲入方面,在Cas9-nickase技术的支持下,两个月内鉴定得到ROSA26位点敲入的首建鼠。
3. 全身性敲除方面,我们应用TALEN或saCas9技术,已为客户完成了长达25KB的LncRNA敲除、双基因敲除和miRNA敲除鼠。
4. 大鼠方面,有成熟的SD大鼠和F344大鼠平台。
5. 大动物方面,我们股东和专家委员会成员已经完成了近十个猴子的基因敲除。
我们不止有实力高效完成基因编辑动物模型的制备,更有能力站在全局角度,协助客户优化技术方案,讨论研究思路,力所能及地减少客户科研项目的不确定风险。
服务优势
1. 不必担心意外,我们为您免费保种可长达半年。
2. 不必担心没有繁殖经验,我们很乐意共享繁殖经验,亦乐意继续承接后续繁殖的任务。
3. 不必担心成果无处安放,我们新建一千平的动物房目前能满足活体和胚胎保存。
4. 不必担心后续实验取样,我们也愿意顺手帮忙取各种组织。
5. 不必担心相隔千里,我们有专门物流空运,可以运输到香港。
6. 不必担心项目是否顺利,我们每两周主动汇报进展情况,关键节点提交阶段性技术报告
部分文章
1. Genome editing with RNA-guided Cas9 nuclease in zebrafish embryos. Jing-Wei Xiong and Jianzhong Jeff Xi. Cell Research (2013) 23:465–472. (IF=14.812)2. Podoplanin maintains high endothelial venule integrity by interacting with platelet CLEC-2. Lijun Xia.3 october 2013| VOL 502 | NATURE| 1 0 5.(IF=38.138)
3. TALEN-Mediated Gene Mutagenesis in Rhesus and Cynomolgus Monkeys. Weizhi Ji. Cell Stem Cell 14, 323–328, March 6, 2014 Elsevier Inc. 323(IF= 22.387)
4. NLRP3基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定。Academic Journal of Second Military Medical University, May 2014, Vol.35, No.5
5. Efficient bi-allelic gene knockout and site-specific knock-in mediated by TALENs in pigs. Jianguo Zhao. SCIENTIFIC REPORTS | 4 :6926 |DOI:10.1038/srep06926
6. Innate immune sensing of bacterial modifications of Rho GTPases by the Pyrin inflammasome. Feng Shao. Nature, 513, 237–241 .(IF=38.138)
7. Podoplanin requires sialylated O-glycans for stable expression on lymphatic endothelial cells and for interaction with platelets. Lijun Xia. BLOOD, 4 DECEMBER 2014 x VOLUME 124, NUMBER 24(IF=11.841)
8. Highly efficient CRISPRCas9mediated transgene knockin at the H11 locus in pigs. Kui Li. Scientific RepoRts | 5:14253 | DOi: 10.1038/srep14253
9. Transplantation of rat embryonic stem cell-derived retinal progenitor cells preserves the retinal structure and function in rat retinal degeneration. Ying Jin and Guo-Tong Xu. Stem Cell Research & Therapy 2015 6:219
10. Whole-exome sequencing implicates UBE3D in age-related macular degeneration in East Asian populations. Xiao-Xin Li. NATURE COMMUNICATIONS 2015.june. (IF=11.329)
11. Generation of TALEN-mediated FH knockout rat model. Zhenhe Suo. Oncotarget. 2016 Aug 19.
12. TALEN构建FNDC5基因敲除小鼠及初步分析. 中国比较医学杂志 June,2016 Vol. 26 No.
13. Defective Intestinal Mucin-Type O-Glycosylation Causes Spontaneous Colitis-Associated Cancer in Mice. Lijun Xia. Gastroenterology 2016;151:152–164.(IF=18.187)
14. TALEN-based generation of a cynomolgus monkey disease model for human microcephaly. Qi Zhou, Shihua Yang and Andy Peng Xiang. Cell Research (2016) 26:1048-1061. (IF=14.812)
15. Generation of biallelic knock-out sheep via gene-editing and somatic cell nuclear transfer. Hong-Ye Zhao, Wen Wang and Hong-Jiang Wei. Scientific Reports. 2016; 6: 33675
16. TALEN-mediated knockout of CCR5 confers protection against infection of human immunodeficiency virus. Zhang, Linqi. JAIDS Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes:Post Acceptance: October 03, 2016
方案概览
步骤 |
技术方案 |
配套产品 |
|
选择技术 |
TALEN |
CRISPR/Cas9 |
|
明确物种 |
小鼠、大鼠、斑马鱼、猪、果蝇、家蚕、疟原虫等 |
|
|
设计靶点 |
一般设计3-5个,从中选2-3个有切割活性且活性高的靶点 |
|
|
体外验证靶点活性 |
—— |
gRNA/Cas9体外酶切法筛选有切割活性的靶点 |
Cas9/gRNA靶点效率检测试剂盒 |
载体构建 |
选择适合载体(附后),使用纳米自组装技术(PCT专利)组装增强型E-TALEN左臂和右臂 |
选择适合载体(附后),构建gRNA/Cas9载体 |
E-TALEN载体构建试剂盒 CRISPR/Cas9载体构建试剂盒 |
SSA活性检测 |
E-TALEN质粒和靶点共转293T细胞,检测luciferase活性 |
—— |
SSA报道质粒构建试剂盒 |
细胞内源活性验证 |
将打靶载体转入目标细胞,检测切割活性 |
T7E1酶 |
|
mRNA显微注射 |
将打靶质粒体外转录, 显微注射到受精卵,移植代孕,构建带有基因突变的首建者鼠(founder,or F0代),T7E1酶切筛选鉴定 |
T7E1酶 |
|
交配 |
founder与野生型鼠交配得F1代,T7E1酶鉴定突变体并进一步测序确认移码突变 |
T7E1酶 |
TALEN载体
编号 |
描述 |
骨架 |
|
VK006-01 | 哺乳动物基因组DNA剪切(CAG- Sp6) | E-TALEN |
|
VK006-02 | 哺乳动物基因组DNA剪切(CMV- Sp6) |
E-TALEN |
|
VK006-03 | 哺乳动物基因组DNA剪切(CMV- Sp6);GFP/mCherry标签 |
E-TALEN |
|
VK006-04 | 哺乳动物基因组DNA剪切(CMV- T7);GFP/mCherry标签 |
E-TALEN |
|
VK006-05 | 动物基因敲除(CMV- T7);哺乳动物kozaK列,体外转录mRNA |
E-TALEN |
|
VK006-06 | 家蚕基因敲除(CMV- T7);家蚕kozaK序列,体外转录mRNA |
E-TALEN |
|
VK006-07 | 果蝇基因敲除(CMV- T7);果蝇kozaK序列,体外转录mRNA |
E-TALEN |
|
VK006-08 | 激活內源基因的转录(CAG- Sp6);TALEA or TALE-TF |
TALEA |
|
VK006-09 |
激活內源基因的转录(CMV-
Sp6);TALEA or TALE-TF |
TALEA |
|
VK006-10 | 哺乳动物基因组DNA剪切(CMV- Sp6);puro-GFP标签 |
E-TALEN |
|
VK006-11 | 哺乳动物基因组DNA剪切(CAG- Sp6);puro-GFP标签 |
E-TALEN |
|
VK006-12 | 哺乳动物基因组DNA剪切(CAG- Sp6);GFP/mCherry标签 |
E-TALEN |
|
VK006-13 | 哺乳动物基因组DNA剪切(CAG- T7);GFP/mCherry标签 |
E-TALEN |
|
gRNA-Cas9载体
编号
描述
骨架
VK001-01
for哺乳动物细胞
gRNA-Cas9
VK001-02
for哺乳动物细胞(荧光抗性标记)
gRNA-Cas9
VK001-03
for体外转录
gRNA-Cas9
VK001-04
for哺乳动物/细胞-荧光抗性标记puro-t2a-mcherry(vk001-02-mcherry)
gRNA-Cas9
VK001-05
for哺乳动物/细胞-Cas9-D10A(Cas9突变体)
gRNA-Cas9
VK001-06
for哺乳动物/细胞-Cas9-D10A-荧光抗性标记
puro-t2a-GFP(Cas9突变体)
gRNA-Cas9
VK001-08
for家禽/细胞(cU6-3-gRNA-puro-t2a-GFP)
gRNA-Cas9
VK001-09
for昆虫/细胞
gRNA-Cas9
上一产品:没有了 下一产品:条件性敲除小鼠、大鼠构建服务 |