内容编辑CRISPR-Cas9技术服务
分类: CRISPR-Cas9
发布时间: 2015-04-25 17:02
CRISPR-Cas9相关技术服务汇总。CRISPR-Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是细菌和古细菌针对外源基因进化而来的获得性免疫防御机制，由gRNA指导Cas核酸酶进行基因定向修饰。该系统由18bp左右的sgRNA识别靶点，空间位阻更小，靶点设计灵活，载体构建简单，切割效率更高，因此自2013年1月两篇Science文章首次报道以来，CRISPR/Cas已成功应用于大鼠、小鼠、斑马鱼、果蝇、线虫、细菌、水稻、烟草、小麦等多个物种的高效基因组编辑。
服务内容
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项目 |
说明 |
周期 |
配套产品 |
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体外检测靶点切割活性 |
gRNA/Cas9体外酶切筛选有切割活性的靶点。 |
1周 |
Cas9-gRNA靶点效率检测试剂盒 |
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gRNA/Cas9载体构建 |
选择有活性的靶点构建Cas9/gRNA载体，多种针对哺乳动物、家蚕、果蝇、水稻、小麦等不同物种优化的载体可供选择。 |
1周 |
gRNA/Cas9载体构建试剂盒 |
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细胞内源活性验证 |
将gRNA/Cas9载体转入目标细胞（植物为原生质体），扩增靶位点，T7E1酶切检测突变率。 |
1周 |
T7E1酶（检测突变） 核酸免提试剂盒 |
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细胞系敲除 |
选择活性高的靶点gRNA载体转染细胞，稀释铺板，筛选突株，获得纯合子双敲除细胞系。 |
2-3月 |
T7E1酶（检测突变） 核酸免提试剂盒 |
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细胞系敲入 |
在敲除的同时提供同源模板donor质粒，获得敲入细胞系，点突变，加特殊元件（如GFP，核信号NLS，穿膜信号，分泌信号，T2A等）。 |
2-3月 |
核酸免提试剂盒 |
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动物敲除 |
选择活性高的靶点gRNA进行显微注射受精卵，代孕，获得敲除动物（大鼠、小鼠、斑马鱼、猪等）的F0(founder)代或F1代。 |
2-7月 |
T7E1酶（检测突变） 核酸免提试剂盒 |
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动物敲入 |
在敲除的同时提供同源模板donor质粒，获得靶向基因转入，点突变，加特殊元件（如GFP，核信号NLS，穿膜信号，分泌信号，T2A等）。 |
2-7月 |
核酸免提试剂盒 |
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条件性敲除 |
通过基因敲入的方式制做floxp鼠（斑马鱼、猪等），与带有组织特异性表达Cre(或Flp)工具鼠交配，获得在特定细胞里把目标基因敲除掉的鼠，若与可诱导CreERT2工具鼠交配获得诱导敲除鼠。 |
8-12月 |
T7E1酶（检测突变） 核酸免提试剂盒 |
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植物敲除 |
选择相应植物的双元载体，构建打靶质粒，原生质体检测内源活性，农杆菌转化，筛先突变体。目前可为拟南芥，水稻，小麦，烟草提供全套服务，其它植物提供定制。 |
详询 |
T7E1酶（检测突变） 核酸免提试剂盒 |
我们的优势
1. 针对哺乳动物，昆虫，植物的启动子以及密码子偏好优化多种载体可供选择，其有效性均经过验证。
2. 多种动物和植物敲除实操作经历，为客户提供全套解决方案和技术支持。
3. 业内顶尖的技术支持团队，4000多例实战经验,累计为北京大学、清华大学等重点科研院校、医院客户定制数百例敲除小鼠、大鼠、水稻、小麦、烟草等。
部分案例
1. 中科院动物所客户在成纤维细胞中，分别成功构建三个基因敲除的细胞系，效率在10-20%（其中一个基因的双链敲除效率达到20%）。
2. 北京大学客户从服务开始的两个月时间内，拿到6个Knock-in细胞系。
3. 西南家蚕实验室从本公司提供服务开始，不到3个月时间拿到基因敲除的家蚕突变体。
4. 台湾中原大学使用本公司提供的质粒陆续成功构建了5种基因敲除的斑马鱼。
5. 香港科技大学使用本公司提供的质粒成功构建了6种基因敲除的斑马鱼。
6. 西南某高校客户累计完成3只条件性敲除鼠。
7. 西南某医院客户累计完成10只敲除鼠。