![LABGENE兰博基因](upload/image/logo_labgene.png)
![T7E1酶](upload/image/T7E1_lit.jpg)
产品信息
货号 | 描述 | 规格 |
001L | T7E1 | 1500U |
T7E1酶切法检测突变体原理
T7核酸内切酶I(T7 endonuclease I, T7E1)识别不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割或切刻双链 DNA,并切割错配碱基 5′ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。现广泛用于TALEN、CRISPR/CAS9形成的突变体检测。
实验步骤
1、PCR扩增出带有突变位点(如TALEN or CRISPR/Cas9的target site)DNA片段,长度约500bp,突变位点最好不位于PCR片段中央,这样将切割出两条大小不同的带。
2、突变体DNA与野生型DNA的PCR产物按下表的体系配制,充分混合后,95 ℃加热5 min(热变性),然后自然冷却至室温进行加、退火复性处理。
反应体系 | 体系1 | 体系2 | 体系3 |
待检样本PCR产物 | 5μl | 2.5μl | 0μl |
野生型样本PCR产物 | 0μl | 2.5μl | 5μl |
10xBuffer | 1.1μl | 1.1μl | 1.1μl |
ddH2O | 4.4μl | 4.4μl | 4.4μl |
Total | 10.5μl | 10.5μl | 10.5μl |
3、然后向上述反应体系中加入0.5μl T7E1酶,37 ℃反应30 min后,2%琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切果。
使用效果
T7E1法检测目标DNA片段的突变率(按灰度计算,突变型带:大约300+200bp,野生型带:大约500bp)
来源
重组T7 核酸内切酶I(T7 endonucleaseI,T7E1)
反应条件
Buffer [50 mM NaCl,10 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2,1 mM DTT(pH 7.9 @25℃)], 即同1X NEBuffer 2,37℃温育。
质量声明
T7 核酸内切酶 I 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。
单位定义
1单位指在50μL反应体系,37℃,1 小时将1 μg超螺旋十字型结构的pUC(AT)质粒酶切成 90% 以上的线性DNA所需要的酶量。
注意事项
T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时,必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时,会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55℃,会导致酶活性降低。
使用限制
本试剂仅限用于科学研究。
上一产品:没有了 下一产品:没有了 |