产品信息

货号	描述	规格
001L	T7E1	1500U

T7E1酶切法检测突变体原理

T7核酸内切酶I(T7 endonuclease I, T7E1)识别不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割或切刻双链 DNA，并切割错配碱基 5′ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。现广泛用于TALEN、CRISPR/CAS9形成的突变体检测。

实验步骤
1、PCR扩增出带有突变位点(如TALEN or CRISPR/Cas9的target site)DNA片段，长度约500bp，突变位点最好不位于PCR片段中央，这样将切割出两条大小不同的带。
2、突变体DNA与野生型DNA的PCR产物按下表的体系配制，充分混合后，95 ℃加热5 min（热变性），然后自然冷却至室温进行加、退火复性处理。

3、然后向上述反应体系中加入0.5μl T7E1酶，37 ℃反应30 min后，2%琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切果。

使用效果

T7E1法检测目标DNA片段的突变率（按灰度计算，突变型带：大约300+200bp，野生型带：大约500bp）

来源

重组T7 核酸内切酶I(T7 endonucleaseI,T7E1)

反应条件
Buffer [50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @25℃）], 即同1X NEBuffer 2，37℃温育。

质量声明
T7 核酸内切酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。

单位定义
1单位指在50μL反应体系，37℃，1 小时将1 μg超螺旋十字型结构的pUC（AT）质粒酶切成 90% 以上的线性DNA所需要的酶量。

注意事项
T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55℃，会导致酶活性降低。

使用限制
本试剂仅限用于科学研究。